war

IPTG (isopropyl-β-D-thiogalactoside) waa analoog ah substrate β-galactosidase, kaas oo aad u jilicsan.Marka la eego soo-gelinta IPTG, soo-saaruhu wuxuu samayn karaa isku-dhafan oo leh borotiinka cadaadiska , Si isku-dhafka borotiinka cadaadiska loo beddelo, si aan loogu dari karin hidda-wadaha bartilmaameedka, iyo hiddaha bartilmaameedka ayaa si hufan loo muujiyay.Haddaba sidee ayay tahay in xoogga IPTG lagu go'aamiyo inta lagu jiro tijaabada?Ka weyn ma ka wanaagsan yahay?
Marka hore, aynu fahamno mabda'a IPTG induction: E. coli's lactose operon (element) waxa uu ka kooban yahay saddex hidde-dhismeedka, Z,Y, iyo A, kuwaas oo codeed β-galactosidase, permease, iyo acetyltransferase, siday u kala horreeyaan.lacZ hydrolyzes lactose galay glucose iyo galactose, ama allo-lactose;lacY waxay u ogolaataa lactose-ka deegaanka inuu ka gudbo xuubka unugga oo uu galo unugga;lacA waxay ka gudbisaa kooxda acetyl acetyl-CoA una wareejiso β-galactoside, taas oo ku lug leh ka saarida saamaynta sunta ah.Intaa waxaa dheer, waxaa jira isku xigxiga hawlgalka O, taxanaha bilawga P iyo hiddo-wadaha nidaaminta I. I hidde-side code waa borotiinka cadaadiska kaas oo ku xidhi kara booska O ee isku xigxiga hawlwadeenka, si operon (meta) loo cadaadiyo damiyay.Waxa kale oo jirta goob xidhitaan oo loogu talagalay hawl-wadeenka hidde-sidaha borotiinka-CAP-da ee kor u kaca ee taxanaha bilawga ah.Hidde-sideyaasha saddexda ensaymes waxaa nidaamiya isla gobolka sharciyeynta si loo gaaro muujinta isku dubaridka ah ee alaabada hiddasidaha.

Maqnaanshaha lactose, lac operon (meta) waxay ku jirtaa xaalad cadaadis ah.Waqtigan xaadirka ah, cadaadiska lac-ga ah ee lagu muujiyay taxanaha I ee hoos yimaada xakamaynta isku xigxiga dhiirrigeliyaha PI wuxuu ku xidhan yahay taxanaha O, kaas oo ka hortagaya RNA polymerase inuu ku xidho isku xigxiga P oo xannibaya bilaabista qoraalka;marka lactose ku jiro, lac operon (meta) waa la kicin karaa Nidaamkan operon (meta), inducer dhabta ah maaha lactose laftiisa.Laktoosku waxa uu galaa unugga waxana uu kataliyadiyaa β-galactosidase si loogu beddelo allolactose.Midda dambe, sida molecule inducer, waxay ku xidhan tahay borotiinka cadaadiska oo beddela qaabka borotiinka, taas oo keenta kala-baxa borotiinka cadaadiska ee taxanaha O iyo qoraalka.isopropylthiogalactoside (IPTG) waxay leedahay saameyn la mid ah sida allolactose.Waa inducer aad u awood badan, oo aan bakteeriyadu dheef-shiidin, aadna u deggan, sidaas awgeed waxaa si weyn loogu isticmaalaa shaybaarrada.

Sidee loo go'aamiyaa diiradda ugu fiican ee IPTG?U soo qaado E. coli tusaale ahaan.
Nooca E. coli BL21 ee hidde ahaan loo farsameeyay oo ay ku jiraan pGEX-ga dib-u-habaynta togan (CGRP/msCT) ayaa lagu tallaalay dhexdhexaad LB dareere ah oo ka kooban 50μg·mL-1 Amp, waxaana lagu beeray habeenkii 37°C.Dhaqanka kor ku xusan waxaa lagu tallaalay 10 dhalo oo ah 50mL dhexdhexaad ah LB cusub oo ka kooban 50μg·mL-1 Amp marka loo eego 1:100 dhaqanka ballaarinta, iyo markii OD600 qiimaha uu ahaa 0.6 ~ 0.8, IPTG ayaa lagu daray diiradda ugu dambeysa.Waa 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0mmol·L-1.Ka dib markii la soo saaro heerkul isku mid ah iyo isla waqti isku mid ah, 1 mL oo ah xalalka bakteeriyada ayaa laga soo qaatay, unugyada bakteeriyada waxaa lagu soo ururiyay centrifugation waxaana la dhigay SDS-PAGE si loo falanqeeyo saameynta kala duwanaansho IPTG ee muujinta borotiinka, ka dibna dooro xoogga IPTG oo leh muujinta borotiinka ugu weyn.
Tijaabooyin ka dib, waxaa la ogaan doonaa in diiradda IPTG aysan ahayn sida ugu badan ee suurtogalka ah.Tani waa sababtoo ah IPTG waxay leedahay sun gaar ah bakteeriyada.Ka badinta feejignaanta waxay sidoo kale dili doontaa unugga;iyo guud ahaan marka la hadlo, waxaan rajeyneynaa in borotiinka aadka u milmay ee lagu muujiyay unugga, si ka sii fiican, laakiin xaalado badan marka xoogga IPTG uu aad u sarreeyo, qadar badan oo ka mid ah ka mid noqoshada ayaa la samayn doonaa.Jirka, laakiin qadarka borotiinka milmay ayaa hoos u dhacay.Sidaa darteed, diiradda IPTG ee ugu habboon inta badan maaha mid ka sii fiican, laakiin hoos u dhigista.
Ujeedada soo saarista iyo beerista noocyada hidde-hagaajinta waa in la kordhiyo wax-soo-saarka borotiinka la beegsanayo lana yareeyo kharashaadka.Muujinta hidda-sidaha la beegsanayo kaliya ma saameeyaan arrimaha cidhiidhiga ah iyo muujinta plasmid-ka, laakiin sidoo kale waxaa saameeya xaalado kale oo dibadda ah, sida xoogga saarista inducer, heerkulka kicinta iyo wakhtiga kicinta.Sidaa darteed, guud ahaan, ka hor inta aan borotiinka aan la garanaynin la muujin oo la nadiifin, waxaa fiican in la barto wakhtiga soo-gelinta, heerkulka iyo xoogga IPTG si loo doorto shuruudaha ku habboon oo loo helo natiijooyinka ugu fiican ee tijaabada ah.